An investigation of the interaction between Aquaporin 5 & Ezrin FERM domain

Sammanfattning

Uttorkande vattenkanaler Vattnet i våra kroppar är livsviktigt och dess rörelse mellan celler styrs av vattenkanalproteiner som heter Akvaporiner. Dessa vattenkanaler finns i cellmembranet och bildar ett hål som vatten kan transporteras både in och ut igenom. Det har upptäckts ett tiotal olika akvaporiner i människokroppen som finns i olika organ och har till viss del olika funktion. En av dessa är Akvaporin 5 som framför allt hjälper oss att fukta våra ögon, producera saliv, och svettas. Om distributionen och transporten av Akvaporin 5 till cellernas väggar inte skulle fungera korrekt skulle vi få problem att producera tårar, saliv och svett när det behövs. En dysfunktionell distribution av Akvaporin 5 har kopplats ihop med Sjögrens syndrom, där man framför allt upplever uttorkning i ögon och mun. Ett annat protein som finns på många ställen i kroppen heter Ezrin. Ezrin har man trott kunna interagera med Akvaporin 5 och sköta transporten av hela akvaporinen till och från cellers väggar. Transporten sker i små sfärer av cellvägg och processen kallas för ”trafficking”. Trafficking är cellens sätt att reglera hur många av ett visst protein som ska uttryckas i cellväggen. Utförandet Peptider är byggstenar som tillsammans skapar ett fullt fungerade protein. Interaktionen mellan peptider undersöktes, en bit av Akvaporin 5 och en bit av Ezrin. Först producerades och renades proteinerna fram för att sedan kunna testas. Interaktionen testades på två sätt. Det första var att blanda proteinerna, och med hjälp av SDS PAGE och Western blot analysera resultatet av blandningen. SDS PAGE är en analyseringsteknik som använder sig av laddade molekyler och elektrisk spänning för att mäta storleken på proteiner i en lösning. Western blot är en analyseringsteknik som använder sig av antikroppar för att upptäcka proteiner i en lösning. Det andra testet genomfördes i en MST maskin som mäter hur proteinerna rör sig ifrån varandra. Resultaten av testerna stödjer hypotesen att Akvaporin 5 och Ezrin interagerar med varandra. Då både SDS PAGE med Western blot och MST resultaten visade att proteinerna kunde skapa ett komplex tillsammans. För att få säkrare resultat behöver fler studier göras. I framtiden skulle samma studier behöva återskapas, även studier med hela proteiner och inte enbart peptidkedjor av det fullständiga proteinet. Handledare: Susanna Törnroth-Horsefield Examensarbete 15 hp i Molekylärbiologi HT 2021 Biologiska institutionen, Lunds universitet