Performance of SpheriCal® standards as calibrants for IgG glycopeptide analysis using MALDI-MS

Sammanfattning

I dagens samhälle finns alla möjliga sorters sjukdomar - alltifrån den vanliga säsongsinfluensan till mer allvarliga infektioner och kroniska sjukdomar som cancer och Alzheimers. Därför finns även ett stort intresse för att kunna ställa rätt diagnos samt söka möjliga behandlingar och att bota dessa sjukdomar. Ett sätt att göra detta på är genom att använda biomarkörer, IgG (Immunoglobulin G) är en biomarkör som visat sig vara passande i detta syfte. Vid användning av MALDI-TOF-MS (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization - Time of Flight - Mass Spectrometry) krävs dock anrikning av glykopeptiderna för att exakta resultat ska erhållas. Genom att utnyttja de starka hydrofila interaktionerna mellan glykanerna, som inte finns hos icke-glykopeptider, kan de glykosylerade peptiderna bli anrikade för att högre intensitet ska erhållas i spektrat. Därav, är syftet med detta kandidatexamensarbete att undersöka huruvida SpheriCals® kalibreringsstandarder är passande i syftet att möjliggöra- samt förbättra användandet av biomarkörer i diagnostik och andra medicinska appliceringar där prov analyseras med MALDI-TOF-MS. Hittills har andra peptidbaserade kalibranter använts och det är därför önskvärt att jämföra dessa med SpheriCal® för att se om den sistnämnda genererar mer exakta mätningar. Det första steget var glykosylering för att få glykopeptider från IgG. Därefter genomfördes experiment med både interna och externa kalibreringsmetoder för naturliga, renade samt till viss del nedbrutna peptider och mänskliga prover från friska individer samt från patienter med COVID-19. Dessa experiment genomfördes i olika matriser, mer exakt i DHB (2,4-dihydroxibensoesyra) och HCCA (α-cyano-4-hydroxikanelsyra) En sammanfattning av resultaten visar att SpheriCal®-kalibranter möjliggör mätningar med hög noggrannhet och små fel för uppmätt m/z (massa mot laddning) för både intern och extern kalibrering vid analys av IgG glykopeptider. Vid extern kalibrering gav SpheriCal®-APH mätningar med väsentligt högre exakthet än för kalibrering med mer traditionellt använt PCS i både HCCA och DHB.