Undersökning av brosktillväxt i hydrogeler med användning av histokemiska och immunohistokemiska färgningsmetoder

Sammanfattning

Ledbroskskador är svåra att läka på grund av låg regenerationsförmåga hos kondrocyter och brist på blodkärl i brosket. Olika kirurgiska tekniker används för att bota ledbroskskador men ett effektivt sätt inte har funnits än. Matrix-Assisted Chondrocyte Implantation (MACI) är baserad på att odla friska celler i hydrogeler och invänta broskbildning i dessa. Sedan implanteras det nya brosket i patienten. Syftet med studien var att undersöka brosktillväxt i kitosan-baserade hydrogeler med immunohistokemiska och histokemiska metoder samt att mäta cell-viabilitet i hydrogelerna med Cell Titer Blue Assay. Kondrocyterna odlades i kitosan- baserade hydrogeler i fem veckor. Vid åtta tidpunkter fixerades hydrogelerna för immun/histokemisk analys, samt sparades CellTiter-Blue-reaktionsblandning för viabilitetsmätning. CellTiter Blue-mätningen visade ökning av antalceller i hydrogelerna över en 27-dagarsperiod. Efter 34 dagar sågs ingen signifikant förändring i förhållande till 27 dagar. Sirius Red visade efter 34 odlingsdagar begränsad kollagen bildning i hydrogelerna medan Hematoxylin-eosinfärgningar visade det efter 27 odlingsdagar. Aggrekan bildning kunde inte påvisas i hydrogelerna med Alcian blue eller Safranin-O. Immunohistokemi med antikroppar mot-kollagen II eller aggrekan kunde inte påvisa dessa bindvävskomponenter i hydrogelerna. Mindre porstorlek i hydrogelerna kan vara ett sätt att förbättra broskbildning. Optimering av antigen avmaskning för att kunna påvisa antigen i både hydrogelerna och kontroller diskuteras.