Optimering av PCR och restriktionsklyvning : med fokus på enzymanvändning och anpassning till gymnasieskolan

Sammanfattning

Detta arbete syftar till att optimera en molekylärgenetisk laboration för att öka dess kostnadseffektivitet samt undersöka applicerbarheten inom gymnasieskolans förutsättningar för undervisning. Studien utgår från laborationen “Who ate your cake?”, där genetisk variation i FGF5-genen, kopplad till pälslängd hos hundar, analyseras med hjälp av polymeraskedjereaktion (PCR), restriktionsenzymklyvning och gelelektrofores. Fokus har legat på att undersöka om mängden restriktionsenzym, specifikt PstI, kan reduceras utan att analysens kvalitet påverkas negativt, samt att bedöma laborationens genomförbarhet i gymnasieundervisning. Resultaten visar att enzymvolymen kan minskas från 2 µl till 1 µl utan någon påtaglig försämring av klyvningseffektivitet eller reproducerbarhet. Detta stöds av densitometrisk analys, som visar en hög överensstämmelse mellan prover vid dessa enzymvolymer. En ytterligare minskning till 0,5 µl leder däremot till ofullständig klyvning och försämrad datakvalitet, vilket indikerar en nedre gräns för metodens tillförlitlighet. Sammantaget visar studien att laborationen kan optimeras för ökad kostnadseffektivitet utan att kompromissa med den vetenskapliga kvaliteten. Samtidigt framgår att laborationen som helhet är tids- och resurskrävande, vilket begränsar dess användbarhet i gymnasieskolan. Däremot kan enskilda moment anpassas och användas för att främja elevers förståelse av molekylärgenetiska metoder samt det naturvetenskapliga arbetssättet.