Optimisation of a Multiparameter Spectral Flow Cytometry Panel for Immune Profiling in Gender-Affirming Hormone Therapy

Sammanfattning

Det är välkänt att det finns könsskillnader i immunförsvaret, men de bakomliggande mekanismerna är fortfarande inte helt förstådda. Könsbekräftande hormonbehandling (gender-affirming hormone therapy, GAHT) ger en unik möjlighet att studera hur könshormoner påverkar immunförsvaret över tid. Eftersom hormonförändringarna sker inom samma individ utan att genetisk bakgrund eller kromosomalt kön förändras kan hormonernas påverkan på immunförsvaret studeras på ett mer kontrollerat sätt. Syftet med denna studie var att optimera en högdimensionell panel för spektral flödescytometri för immunprofilering hos individer som genomgår GAHT. Antikroppstitrering och paneloptimering utfördes med kryopreserverade helblodsprover. För CD3, CD45 och CD57 observerades tydliga skillnader i färgningsintensitet mellan olika antikroppskoncentrationer samt en tydlig separation mellan positiva och negativa populationer. Optimala slutkoncentrationer valdes baserat på staining index (SI), visuell bedömning av populationsseparation och bakgrundssignal. För CD4 och CD8 observerades däremot inga tydliga skillnader mellan spädningarna inom det testade intervallet, vilket indikerar att ytterligare optimering krävs. Resultaten visar att systematisk antikroppstitrering är en viktig del i optimeringen av högdimensionella paneler för spektral flödescytometri. Optimeringen som genomfördes i denna studie utgör en grund för fortsatt utveckling av den fullständiga panelen och framtida longitudinell immunprofilering hos individer som genomgår GAHT. På sikt kan detta bidra till ökad förståelse för hur könshormoner påverkar immunförsvaret och de skillnader som observerats mellan könen.