Impact of Environmental Conditions on Protein Stability in Dried Blood Spots for Targeted Proteomics Analysis

Sammanfattning

Hjärt- och kärlsjukdomar är den vanligaste dödsorsaken globalt. Genom att mäta biomarkörer med anknytning till dessa sjukdomar, (exempelvis Apolipoprotein A1, Apolipoprotein B samt Lipoprotein A), kan det finnas möjligheter att rädda liv genom livsstilsförändringar eller medicinering. Att screena en befolkning kräver dock robusta analysmetoder samt ett effektivt tillvägagångssätt för att hantera en stor mängd prover. Kvantitativa torkade blodfläckar är en minimalinvasiv provtyp som kan tas i hemmet utan sjukvårdspersonal. Proven kan skickas på posten istället för med sjukvårdstransport, vilket underlättar transportlogistiken. En viktig skillnad mellan att skicka prover med posten istället för en sjukvårdstransport är att temperatur och luftfuktighet inte kontrolleras, vilket kan påverka proteinstabiliteten i de torkade blodfläckarna. I det här projektet undersöktes den inverkan extrema väderförhållanden kan ha på torkade blodfläckar under transport mellan provtagningsställe och labb. Detta möjliggjordes genom att använda masspektrometribaserad riktad proteomik. Genom att använda sig av rekombinant tillverkade proteinstandarder (SIS-PrESTar) kunde proteiner koncentrationsbestämmas på absolut nivå. Studien tittade på hur flertalet potentiellt viktiga parametrar påverkar den mätbara nivån av proteiner. Bland dessa parametrar ingick en kombination av hög temperatur & luftfuktighet samt paketering. Ett försök till att spåra proteinnedbrytning gjordes genom tillsätta interna standarder i ett tidigt skede i arbetsflödet för en del av proverna. Resultaten visade att mätbar proteinnivå minskar när torkade blodfläckar utsätts för höga temperaturer & hög luftfuktighet, även om proverna förpackats rigoröst i dubbla blixtlåspåsar utrustade med luftavfuktare (silica-gelpåsar). Slutligen så var det möjligt att kvantifiera proteiner prover som tillsatts SIS-PrESTar innan temperaturbehandlingen, om än med lägre precision.