Protokollutveckling förprovförberedelse avvassleprotein koncentrat införflödescytometrianalys

Sammanfattning

Vassleprotein koncentrat (WPC) är en proteinrik biprodukt från ostproduktion somvanligtvis analyseras mikrobiologiskt med odlingsbaserade metoder. Dessa metoderär dock tidskrävande och orsakar ekonomiska förluster vid fördröjda analysresultat.Syftet med denna studie var att undersöka om flödescytometri kan användas som ettsnabbare alternativ för att analysera bakterieinnehåll i WPC. För att möjliggörasådan analys utvecklades en provberedningsmetod som syftar till att minska provetsviskositet och avlägsna störande komponenter utan att påverka bakteriernasintegritet. Prover av WPC förbehandlades med enzymet Proteinase K i olikakoncentrationer och inkubationstider. Dessutom testades pH-justering ochproteinutfällning för att optimera separationen mellan proteiner och bakterier.Proverna analyserades med både traditionell odling och flödescytometri, där levandeoch döda celler färgades med SYTO 9 respektive propidiumjodid (PI). Resultatenvisade att Proteinase K snabbt reducerade proteinhalten i WPC, men samtidigtkunde främja bakterietillväxt vid längre inkubationstider. Odlingarna visade attbakterier huvudsakligen återfanns i pelleten och den första supernatanten, samt attbehandling med enzym eller pH-justering påverkade tillväxtmönstret. Streptococcusthermophilus var en av de vanligast förekommande bakterierna i proverna.Flödescytometri visade begränsad förmåga att skilja levande från döda celler,särskilt i kontroller där hög bakgrund och låg cellkoncentration påverkademätningarnas noggrannhet. En oväntat stor andel levande celler detekterades även idöda kontroller, vilket tyder på att färgningen kan störas av WPC:s komplexasammansättning. Sammanfattningsvis visade studien att en effektiv provberedningär avgörande inför flödescytometrisk analys. Däremot behöver bådefärgningsprotokoll och flödescytometri anpassas bättre till WPC. För framtidastudier rekommenderas optimering av färgningsprotokoll samt utvärdering avalternativa fluoroforer och enzymatiska förbehandlingar.