Fingerprint method for assessing the presence of non-natural DNA in blood samples as a result of AAV based gene doping

Sammanfattning

Genterapi förutspås vara en mycket lovande behandling för flertalet sjukdomar och detta har lett till utvecklingen av nya och förbättrade leverans metoder av sådana terapier. Rekombinanta Adeno-associerade virus (rAAV) vektorer, som kan leverera valda gener av intresse till målceller, anses vara lämpade för utvecklingen av nya leveransmetoder, och vissa produkter baserade på dessa används redan kliniskt. Utvecklingen av dessa behandlingar har dock lett till en ökad risk för felanvändning, vilket leder till möjligheten att utnyttja dessa rAAV vektorer inom gendoping. För tillfället, när det anses nödvändigt, så upptäcks AAV injektioner från behandlingar genom biopsier av den berörda vävnaden, något som inte är kompatibelt med rutinmässiga anti-dopingkontroller. Det finns därmed ett behov av nya detektionsmetoder, som specifikt och med tillräckligt hög sensitivitet kan upptäcka genomen från dessa rAAV vektorer. Modeller för blodkroppsinfektioner sattes därmed upp, och Jurkat cellinjer transducerades med en rAAV6 vektor. DNA extraherades och kvantifierades sedan genom en flerstegsprocess som resulterade i specifik detektion av rAAV genomer. Denna rapport hjälper till att ge stöd åt faktumet att det är möjligt att modellera blodkroppsinfektioner i en laboratoriemiljö och att episomalt rAAV genom kan detekteras via ITR2-specifik targeting.