Helblods DNA-extrahering med tre metoder och koncentrationsmätning med nytt fluorometri-kit. Jämförelser av kvantitet och kvalitet av extraktionsmetoder samt jämförelse av mätmetoder.

Sammanfattning

DNA-extraktion är det första steget inför genetiska analyser. Det går ut på lysering av vävnad för att sedan utvinna rent DNA. I blod går det att utvinna humant DNA från lymfocyterna. Syftet med arbetet är att validera två nya DNA-extraktionsmetoder och en ny DNA-koncentrationsmätning. DNA-extraktionmetoderna ska implementeras på avdelningen som reserv/alternativa metoder till QIAsymphony. DNA-koncentrationmätningen är menat att byta ut den tidigare metoden Qubit. I studien extraherades DNA från 20 st pooler bestående av humant helblod med tre olika extraktionsmetoder. Det användes en mL helblod med QIAsymphony DSP DNA Midi Kit och QIAamp DNA blood midi kit (spin protocol) och 350 μL för EZ1&2 DNA Blood 350 μl Kit (48). Efter extrahering kvantifierades DNA-koncentrationen med spektrofotometri och två olika fluorometrimetoder, Qubit-kitet och DeNovix-kitet. Sedan mättes också det kvalitativa värdet med spektrofotometri och gelelektrofores. Resultaten visade att EZ2 och QIAamp gav högre DNA-koncentrationer och DNA bestod av en högre kvalitet än QIAsymphony. DeNovix-kitet visade högre koncentrationer jämfört med Qubit-kitet. Slutsatsen av studien är att de två nya extraktionsmetoderna går att implementera på avdelningen som reserv/alternativa metoder och DeNovix-kitet kan ersätta Qubit-kitet.